Vol.67 No.1 January 2019

原著・基礎

質量分析法を用いた基質特異性拡張型βラクタマーゼ産生菌検出法の構築に関する検討

池ヶ谷　佳寿子^{1, 2）}, 松村　有里子^2）, 島　圭介^3）, 岩澤　篤郎^2）, 木村　哲^2）, 土屋　憲^1）

^1）静岡市立清水病院検査技術科^＊
2）東京医療保健大学大学院医療保健学研究科
^3）島津製作所分析計測事業部グローバルアプリケーション開発センター

要旨

　近年，マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計（MALDI-TOF MS）を用いた微生物同定法が臨床応用され，低コストで迅速性と正確性に優れた微生物同定が実現した。さらに薬剤耐性菌の早期検出に向けた研究が行われている。カルバペネマーゼ産生菌に対して，抗菌薬とその加水分解産物をMALDI Biotyperで捉えることにより検出できることが報告されているが，VITEK^Ⓡ MSで検討された報告は少ない。本研究は，基質特異性拡張型βラクタマーゼ（ESBLs）の検出を目的として，VITEK^Ⓡ MSを用い，cefotaxime（CTX）を基質として加水分解産物の確認を試みた。供試菌株はEscherichia coli ATCC^Ⓡ 25922^TM（感性株），E. coli NCTC 13462（bla_CTX-M group 2産生株）およびKlebsiella pneumoniae ATCC^Ⓡ BAA-1705^TM（KPC産生株）とした。CTXを生理食塩水で溶解し，35℃，60分間反応後のマススペクトルは，455.77 Da（プロトン付加体）と477.85 Da（ナトリウム付加体）のシグナルが確認された。2-cyano-4-hydroxycinnamate（CHCA）の2量体のシグナル強度を用いて標準化した相対シグナル強度I₄₅₆およびI₄₇₈とCTX量との間に直線関係が認められた。CTXとE. coli NCTC 13462の菌懸濁液を混和後のマススペクトルには，369.86 Daと413.74 Daの新たなシグナルが観察された。カルバペネマーゼ産生菌でも同様のシグナルが確認された。以上のことから，VITEK^ⓇMSにおいてもCTXとβラクタマーゼによる反応生成物を捉えることによりESBLsの検出が可能であることが確認された。さらに，MALDI-TOF MSで検出可能な化合物は，シグナル強度を標準化することでCTXに対するESBLs産生菌の薬剤感受性を推察できる可能性が示唆された。

Key word

antibiotics, antibiotic resistance, MALDI-TOF MS, cefotaxime, hydrolysis

別刷請求先

^＊静岡県静岡市清水区宮加三1231

受付日

2018年5月2日

受理日

2018年8月28日

日化療会誌 67 (1): 29-37, 2019